限外ろ過チューブのメンテナンスと使用方法

限外ろ過チューブのメンテナンスと使用方法

限外ろ過チューブの機能：

1）濃度; 2）脱塩; 3）バッファーを交換します。 4）部分精製の効果があります。

1.新しい限外ろ過チューブは他の処理なしで直接使用できます。

2.限外ろ過チューブは高温で滅菌できません。

3.濃縮タンパク質を交換する際の限外ろ過チューブの処理

限外ろ過チューブは再利用できます。 0 .1M NaOHに1〜2時間浸し、水で洗浄してから、遠心分離機で関連する溶液（滅菌水またはPBS）で3回洗浄します。これを使用して、新しいタンパク質を濃縮できます。

4.通常配置されている限外ろ過チューブの処理

頻繁に使用する限外ろ過チューブの場合は、0 .1M NaOHに1〜2時間浸し、水で洗浄してから滅菌水に浸します。 フィルターメンブレンを湿らせたままにし、バクテリアの繁殖を防いでください。

5.長時間置かれた限外ろ過チューブの処理

限外ろ過チューブを長期間使用しない場合は、0 .1M NaOHに1〜2時間浸し、水で洗浄し、20％エタノールに浸して保管します。 フィルターメンブレンを湿らせたままにし、バクテリアの繁殖を防いでください。

6.限外ろ過チューブに使用される遠心速度

遠心速度は通常4000rpmです（3000gが一般的に推奨され、最大は4000gを超えることはできません）。 5 - 8分間遠心分離した後、4mlのサンプルを1ml未満から数十マイクロリットルに濃縮できます。 速度が速すぎると、標的タンパク質が脱落し、標的タンパク質が失われます。 低速、時間のかかる、作業効率の低さ。

7.ガンヘッドが限外ろ過チューブ内に伸びる場合の注意事項

限外ろ過チューブにタンパク質溶液またはバッファーを追加する場合は、青いガンヘッドを使用できます。 ただし、濃縮されたターゲットタンパク質が限外ろ過チューブの底から吸収される場合は、黄色のガンヘッドを使用する必要があります。 ガンヘッドを限外ろ過チューブに挿入するときは、フィルターメンブレンに穴を開けないように、フィルターメンブレンに触れないようにする必要があります。

8.限外ろ過チューブのタンパク質吸着損失を減らします

限外ろ過チューブの膜はタンパク質を吸着することができ、これにより標的タンパク質が約30パーセント減少します。 タンパク質の損失を減らすために、標的タンパク質溶液を吸収した後、限外濾過チューブの底をタンパク質緩衝液でパージして、フィルター膜に吸着されたタンパク質の大部分を洗浄し、標的タンパク質の損失を減らします。 精製タンパク質が濃縮されている場合は、濃縮量が少なすぎないように注意してください。 一般的に、どのように遠心分離しても、約200 µLのプロテイン溶液が底に保持されます。

9.限外ろ過チューブの故障を定義する方法

通常の使用では、濾膜に穴が開いていない場合、濃縮タンパク質溶液にタンパク質が含まれていないか、量が非常に少ない（標的タンパク質を含む）のに対し、最初の濾過溶液には標的タンパク質が含まれていますが、これは濾膜が無効であることを示しています。新しい限外ろ過チューブと交換する必要があります。