組み換えタンパク質を発現する酵母の清澄化と限外濾過のための効率的かつ低コストのプロセス

酵母による外来遺伝子の発現は、組み換えタンパク質やペプチド、抗体やワクチン、サイトカイン、成長因子、ホルモンなどの生理活性物質を生産できるだけでなく、工業用酵素、機能性食品、生物材料の生産にも使用でき、幅広い応用の見通しがあります。

 

酵母発現システムには、サッカロミセス・セレビシエ発現システムとメタン酸化酵母発現システムの2つの一般的な発現システムがあります。メタノール酵母発現システムは現在最も広く使用されている酵母発現システムであり、最も一般的に使用されているのはメタノールを炭素とエネルギーとして使用できるピキアです。その他、ハンセン酵母、スフェロイデスなどがあります。

 

どのような酵母発現システムであっても、その下流の分離および精製プロセスは類似しており、具体的なプロセスフローは、組換えタンパク質およびポリペプチド薬物の酵母発現を例に挙げています。

 

Guidling 精密濾過膜カセットは、オープンフローチャネルと接線流濾過モードを採用しており、酵母発酵液や大腸菌分解液などの複雑な供給液を高速で効果的に処理し、小規模テストから生産規模まで線形増幅を確保できます。コンパクトなモジュール設計、シンプルなパイプライン接続、システムの独立性と可読性により、オペレーターを保護し、生物学的汚染を防止できます。メンテナンスや洗浄検証も不要です。そのため、下流処理の初期段階の清澄化ステップに非常に適しています。

 

UF/DFプロセスの主な目的は、不純物を除去し、バッファーを置換することです。Guidling限外濾過膜カセットは、膜の孔径の均一性が良好で親水性が強いため、膜の流量が高く、タンパク質の吸着が少なく、流路設計が最適化されており、圧力降下が少なく、材料の移動が容易で、濾過時間が大幅に短縮されます。さらに、製品シリーズは完全かつ柔軟で、さまざまな規模のさまざまなアプリケーションのニーズに対応できます。そのため、下流処理のUF/DFステップに非常に適しています。

 

以下はGuidling膜の応用例ですカセット酵母による組み換えタンパク質の発現。

 

精密濾過による浄化

{{{0}}.11平方メートル、0.22μm孔の膜カセットを使用して、精密濾過により1.5L​​の酵母発酵液（標的タンパク質分子量42-55 KD）を清澄化しました。精密濾過の全プロセスにおいて、標的タンパク質の回収率、濁度の変化、膜フラックスの減少を調査しました。

0-17分は濃縮プロセス、17-32分は洗浄および濾過プロセスです。精密濾過プロセス全体を通じて、TMPは徐々に増加し、液体の入口速度は変化せず、平均物質流量は45LMHでした。

液体の濁度は、精密濾過前は600NTUでしたが、精密濾過後は8NTUとなり、濁度が明らかに変化しました。

結果は、標的タンパク質の収率が 90% を超えたことを示しました。Guidling Technology 0.22μm 膜カセットは安定しており、このアプリケーション シナリオに適しています。

 

限外濾過濃縮

 

 

結果は、ターゲットタンパク質が完全に捕捉されたことを示しました。Guidling Technology 10kd メンブレンカセットは安定して動作し、このアプリケーションシナリオに適しています。

酵母によって発現された組み換えタンパク質のほとんどは、高度に発現されていませんでした。濾過液の濁度は明らかに低下し、タンパク質の回収率は高くなりました。その後のクロマトグラフィー時間が長すぎると、タンパク質に悪影響を与えるため、クロマトグラフィーのサンプリング時間を短縮するために、1段階の限外濾過濃縮を追加し、サンプル採取後にターゲットタンパク質を迅速に濃縮することができます。これにより、時間を節約し、充填量を減らし、生産コストを削減するという目的を達成できます。

 

Guidling Technology の精密濾過膜カセットは、一般的に供給液の濁度を 20NTU 未満に下げることができ、その後の限外濾過およびクロマトグラフィーのニーズを完全に満たします。限外濾過膜カセットの限外濾過回収率は材料によって異なり、一般的な回収率は 90-95% に達することがあります。

Guidling Technology では、関連する評価のためのテスト キットのリクエストを歓迎します。

 

ガイドリングについて

貴晶科技は、バイオ医薬品、細胞培養、バイオ医薬品の精製と濃縮、診断、工業用流体に重点を置く国家ハイテク企業です。当社は、バイオ医薬品、細胞培養などの応用シナリオに完全に適合する遠心濾過装置、限外濾過および精密濾過カセット、ウイルスフィルター、TFFシステム、デプスフィルター、中空糸などの開発に成功しました。当社の膜と膜フィルターは、前濾過、精密濾過、限外濾過、ナノ濾過の濃縮、抽出、分離に広く使用されています。小型の使い捨て実験室濾過から生産濾過システム、無菌試験、発酵、細胞培養など、当社の多くの製品ラインは、試験と生産のニーズを満たしています。貴晶科技はあなたとの協力を楽しみにしています！