遠心濾過装置に関するよくある質問
Q1. 分子量の異なるタンパク質を分離する必要があるのですが、タンパク質の分子量はどの程度の差があればよいのでしょうか？
A: 2 つのタンパク質のサイズは 10 倍以上異なる必要があります。
Q2. 遠心分離できるアルフィルター装置は滅菌されており、アルカリ洗浄に耐性がありますか?
A: 75%エタノール水溶液による滅菌が可能で、膜は0.1-0.5N水酸化ナトリウムアルカリ洗浄に耐えます。
Q3. 濃縮中にタンパク質が沈殿した場合はどう対処すればよいですか?
A: タンパク質の濃縮が速すぎたり、濃縮しすぎたりすると、タンパク質の沈殿が生じる可能性があるため、濃縮後のタンパク質の最終濃度が高すぎてはいけません。 濃縮速度の影響を受けやすく、沈殿しやすいタンパク質には、次のような改善方法が提案されています。
遠心速度を下げる
より高い分子量カットオフを備えた限外濾過膜を使用する
濃縮されたチューブを吹き、吸引し、遠心分離します。
Q4. 考えられる理由は何ですか?遠心濾過装置遠心分離できないのですか？
A: 限外濾過チューブが遠心分離できない場合は、最初の遠心分離に約 20 パーセントのエタノール水溶液を使用できます。これは、限外濾過膜が完全に乾燥しており、膜の表面が弱い疎水性であり、低浸透圧で浸透後にフラックスを回復できるためです。表面張力溶剤。
Q5. 遠心濾過装置の正しい使用方法と保管方法
A: 遠心濾過装置は、使用前に純水で遠心分離して、その完全性を確認する必要があります。 使用後は膜の乾燥を防ぐため、濡れた状態で保管する必要があります。
Q6. 遠心濾過装置はどのようにしてエンドトキシンを除去するのでしょうか？
A: 当社が提供した遠心濾過装置はエンドトキシンで処理されておらず、エンドトキシンは自然界に広く存在するため、エンドトキシンが必要なサンプルは実験前に 0.5N 水酸化ナトリウムで事前洗浄し、その後洗浄することができます。エンドトキシンの大部分を除去するRO水。
Q7. 濃縮されたタンパク質を下流の分析に使用すると、干渉があることがわかりました。その理由は何ですか?
A: 遠心濾過装置は緩衝液または精製水で事前洗浄することができます。 干渉がまだ存在する場合は、0.1N 水酸化ナトリウムで洗浄し、次に精製水で洗浄します。
Q8. I濃縮後の濃縮物中に目的タンパク質が存在しないことが判明する。 考えられる理由は何ですか?
A: 1) タンパク質の初期濃度は低すぎてはなりません。濃度が低すぎると膜が保持できない可能性があります。
2) 適切なメンブレン孔径を選択します。 フィルターチューブの遠心濃縮はデッドエンドろ過に属し、膜の孔径は一般に標的タンパク質の2倍未満またはそれ以上です。
3) 適切な遠心速度を選択してください
4)目的タンパク質が沈殿するかどうか
Q9. 遠心濾過装置の不動態化処理
A: 遠心フィルターデバイスの表面の不動態化前処理により、膜表面でのタンパク質の吸着損失を減らすことができます。ほとんどの場合、希釈タンパク質溶液を濃縮する前にカラムを前処理すると回収率が向上します。溶液が露出した部分を埋めることができるためです。膜および表面上の空のタンパク質吸着サイトを除去するには、不動態化方法では、カラムを大量の不動態化溶液に 1 時間以上事前に浸し、蒸留水でカラムを完全に洗い流し、その後蒸留水でカラムを 1 回遠心分離します。メンブレン上に残っている可能性のある不動態化溶液を完全に除去するには、不動態化後にメンブレンが乾燥しないように注意してください。将来の使用のために保管しておきたい場合は、メンブレンを湿った状態に保つために滅菌蒸留水を追加する必要があります。お問い合わせください。一般的なパッシベーション ソリューションのエンジニア。
Q10. 限外濾過膜は分子を階層的に濾過しますか?
A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >ただし、100kd 限外濾過膜を使用した場合、95% は膜の細孔サイズよりも小さい分子は膜を自由に完全には通過しません。 67kdの分子保持率は70パーセント以上、43kdのタンパク質も40パーセント以上カットオフされ、混合溶液中のさまざまな成分が膜を通過するのは単一成分溶液ほど単純ではなく、実際には簡単ではありません。 2 つの高分子を単離したい場合、それらの分子量の差は 8 倍以上である必要があります。
Q11. 限外濾過によって大きな分子と小さな分子を効果的に分離するにはどうすればよいですか?
A: プロセスの必要性により、高分子内の不純物が除去されたり、高分子から小分子が除去されたりすることがありますが、これは生産では正常です。 適切な膜の孔径、濾過方法、操作条件を選択することが非常に重要です。 一般的に言えば、膜の MWCO 仕様が 2 つのタンパク質の間で選択されている場合、比較的理想的な分離を達成できます。 タンパク質溶液が比較的希釈されている場合は、低圧で操作するとより良い結果が得られます。 より良い分離効果を得るには、タンジェンシャルフローろ過を選択し、複数のダイアフィルトレーションを実行します。
