DTPワクチンの製造工程における限外濾過の応用
の適用Uでの濾過P生産Pの過程ティッカー Vニキビ
1.DTPワクチン
一般に百日咳として知られる百日咳は、百日咳菌によって引き起こされる急性呼吸器感染症で、主に乳児や幼児が罹患します。 呼吸器の飛沫を介して感染し、潜伏期間は 7 ～ 10 日です。 患者には咳などの痰の蓄積の症状が現れます。 ジフテリアは、Corynebacterium diphtheriae によって引き起こされる急性気道感染症です。 細菌は鼻粘膜や喉に侵入して増殖し、外毒素を生成して局所的な炎症や組織壊死を引き起こします。 破傷風菌は破傷風菌によって引き起こされ、皮膚や粘膜の傷口から体内に侵入します。 嫌気性条件下で増殖し、毒素を生成し、発作的な筋肉収縮を引き起こします。
DTPワクチンは、百日咳菌、ジフテリア毒素、破傷風毒素の有効成分を一定の割合で混合し、水酸化アルミニウムアジュバントに吸着させた混合ワクチンです。 百日咳、ジフテリア、破傷風の3つの病気を予防するために使用されます。
2. DTPワクチンの製造工程
DTP ワクチンは通常、不活化ワクチンです。 DTP ワクチンの調製は、主に安全上の理由から、不活化ワクチンの製造プロセスに従います。 現在、中国におけるDTPワクチンの生産プロセスは、主に1970年代から1980年代の技術に基づいています。しかし、プロセス全体を通じて、従来の濾過段階が多すぎる透析ステップが含まれており、製品の生産プロセス全体に大きな影響を与えています。 オープンチャネルを備えたタンジェンシャルフロー膜ろ過製品は、生物由来製品の下流分離において、低いせん断力や高い回収率などの利点をもたらします。 これらは、高濃度、高粘度、高粒子含有量のサンプルの分離に特に適しており、DTP ワクチンの製造プロセスに適しています。
3. 無細胞DTP混合ワクチン抗原液の精製工程における中空糸型限外ろ過技術の応用
(1)材料と方法
①サンプル
除染・精製された無細胞DTP抗原液（以下、除染抗原液という）。
②主な試薬と器具
注射用グレードの水。 塩化ナトリウム (医薬品グレード); 透析バッグ; 10kDaの中空糸; 蠕動ポンプ。
③無細胞DTP抗原液の限外濾過・精製
まず、10kDa 中空糸を使用して、除染した抗原溶液を最初の体積の約 5- 倍に濃縮します。 続いて、濾過と洗浄のプロセスを開始します。 次に、ろ液量が初期量の約 4 ～ 5 倍に達した時点でろ過を停止します。 最後に、システム全体を洗浄し、1- 倍量の生理食塩水を使用して濾液を回収します。
④無細胞DTP抗原液の透析・精製
除染した抗原溶液を無菌的に透析バッグに詰め、0.85% 滅菌塩化ナトリウム溶液に浸漬し、2-8 度で透析を行います。
⑤精製液の同定
限外濾過および透析で回収された液体サンプルを精製前の容量に比例的に戻します。 除染した抗原溶液を対照として使用し、12% SDS-PAGE を使用してサンプルの純度を分析します。 溶液中の固形分を測定し、サンプルを 10,000 rpm で 15 分間遠心分離した後の回収率を計算します。
結果
①中空糸限外濾過濃縮・洗浄
限外濾過濃縮プロセスでは、70 分以内に 4,800 mL の濾液が得られ、5- 倍の濃縮が得られます。 濾過速度は着実に低下し、平均濾過速度は 42 LMH (69.6 mL/分) になります。 洗浄プロセス中、90 分以内に 5,300 mL の濾液が得られ、4.4- 倍の洗浄が行われ、濾過速度は着実に低下し、平均濾過速度は 36 LMH (59.5 mL/分) になります。 最後に生理食塩水 1,200 mL で全体を洗い、先の洗浄液（1,200 mL）と混ぜます。 液体の最終濃縮係数は 2.5- 倍です。 限外濾過と比べ、透析は透析液を5回交換する必要があり、所要時間は約6日です。
②精製液の同定
SDS-PAGE 分析により、以下の図に示すように、限外濾過法と透析法の両方で精製された無細胞 DTP ワクチン抗原液の純度は比較的変化していないことがわかりました。 限外濾過精製の回収率は、下表に示すように透析精製に比べて若干低くなります。
|
サンプル |
固形分(%) |
回収率（％） |
|
除染された抗原溶液 |
0.872 |
/ |
|
限外濾過回収液（還元） |
0.803 |
92.1 |
|
透析回収液（還元） |
0.813 |
93.2 |
結論
中空糸型限外濾過は、食品、発酵、製薬、環境保護、化学工学などの業界で高分子物質の分離、濃縮、精製に広く使用されている膜分離技術です。 この実験では、中空糸限外濾過技術を使用して、除染された無細胞 DTP 抗原溶液を精製しました。 実験者は、浄化効率と回収率の点で従来の透析と比較しました。 その結果、限外濾過は解毒剤と色素の除去効率が高く（透析の場合は 5-7 日かかるのに対し、3 時間以内に達成可能）、回収率が高いことがわかりました。 これらは、無細胞DTPワクチン抗原液の限外濾過精製への中空糸の適用が実現可能であることを示唆している。 既存の透析プロセスを置き換えることができます。
